・100・第42卷第2期Vol.42No.22021
Journal of MuDanJiang Medical Lniversity
国产盐酸奥洛他定滴眼剂的质量评价
董双涛1，李宝霞-沈丹丹2，赵丽元2，张春泓2，马郑2
国产轮胎质量排行榜(1.山西药科职业学院，山西太原030031；2.大连市药品检验所，辽宁大连116021)
摘要：目的评价国产盐酸奥洛他定滴眼剂的质量。方法采用现行法定标准结合风险控制的理念开展了国产制剂与原研制剂的对比研究，通过杂质谱研究、抑菌剂及抑菌效力研究、毒性元素研究、包材研究，评价国产制剂质量。结果研究结果表明，国产制剂质量标准需要提升。但国产制剂抑菌剂、毒性元素、塑化剂等研究结果均与原研制剂一致。结论国产盐酸奥洛他定滴眼剂质量与原研制剂一致。
关键词：盐酸奥洛他定滴眼液；质量评价；风险控制理念
中图分类号：R197文献标识码：A文章编号：1001-7550(2021)02-0100-06
The evaluation of domestic olopatadine hydrochloride eye drops
DONG Shuang-tao et al
(Shanxi Pharmaceutical Vocational College,Taiyuan030031,China)
Abstract:Objective To evaluate the quality of domestic olopatadine hydrochloride eye drops.Methods Based on the current legal standards and the risk-based control approach,the comparative study of domestic preparation and original preparation was carried out.The quality of domestic preparation was evaluated through the study of impurity spectrum,antibacterial agent and antibacterial effectiveness,toxic elements and packaging materials.Results The quality standards of domestic preparations need to be improved.Howev-er,the results of antibacterial agents,toxic elements and plasticizers of domestic preparations were consistent with those of the original preparation.Conclusion The quality of domestic olotatidine hydrochloride eye drops is the same as that of the original preparation.
Key words:olopatadine hydrochloride eye drops；quality evaluation；risk-based control approach
盐酸奥洛他定滴眼液是一种新型的组胺受体阻断剂，用于过敏性结膜炎的［1］，不良反应以头痛、困倦较为常见［2］。盐酸奥洛他定滴眼液率先由诺华制药研发生产，于2004年在美国上市。盐酸奥洛他定相关制剂是国家食品药品监督管理总局下达的药品评价性抽验品种。本研究抽取全国范围内的
样品，由药品监管部门为实施主体，可以公平、客观、全面的评价该品种的仿制药，以达到修订药品质量标准，协助企业提升药品质量的目的。由于这些品种已经通过药学评审，达到了仿制药上市的技术要求。但由于当时审评理念和科学认知的局限，往往存在一定风险隐患，如滴眼剂中的抑菌剂、注射剂的抗氧剂等研究往往不够充分。因此在评价方法上，既要能够识别出仿制品存在的高风险隐患，切实保证人民众用药安全，又要高效并可实施。2018年大连市药品检验所承担了盐酸奥洛他定滴眼剂的质量评价工作。课题组提出基于风险控制理念的评价方法［3］，研究首先基于现行法定标准检验分析，然后开展探索性研究。1仪器与试药
1.1仪器Waterse2695高效液相谱仪器，配备2998型二极管阵列检测器、生物安全柜(thermo Scientific)、电子恒温箱(上海成顺)、高压蒸汽灭菌器(Tomy autoclave ss-325)、GC-MSQP2020气质谱联用仪(日本岛津公司)、NexIon300X型电感耦合等离子体质谱仪(美国PE公司)、MSA225S-100-DA 型分析天平(德国sartrious公司)、Milli-Q Academic 超纯水仪(美国Millpore公司)。
1.2/■药品与试剂菌种：大肠埃希菌(Escherichia coli)［CMCC(B)44102］第3代、金黄葡萄球菌(Staphylococcus aureus)［CMCC(B)26003］第3代、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)［CMCC(B) 10104］第3代、白念珠菌(Candida albicans)［C MCC(F)98001］第3代、黑曲霉(Aspergillus niger)［CMCC(F)98003］第3代。
培养基：胰酪胨大豆肉汤培养基、胰酪胨大豆琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂
作者简介：董双涛(1980-)，男，本科，讲师，研究方向：质量标准的建立与提升。通讯作者：马郑，E-mail：20483047@qq 。
培养基和pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，上述均购自北京奥博星有限公司。
苯扎氯铵系列对照品：十二烷基二甲基苄基氯化铵（C q苯扎氯铵），批号：1-JYP-14-1、纯度:98. 0%；十四烷基二甲基苄基氯化铵（C14苯扎氯铵），批号：2-KAA-136-1，纯度：98.0%，来源:TRC。
单元素标准溶液：铅（批号163063-1）、镉（批号171037-2）、砷（批号156014-2）、铜（批号171048-2）、汞（批号163019-2）、铢（批号157028）、铑（批号171005），均来源于国家有金属及电子材料分析测试中心，浓度：1000pg/mL，硝酸为优级纯，天津科密欧化学试剂有限公司。
塑化剂对照品：邻苯二甲酸二甲酯（DMP）、邻苯二甲酸双（2-乙基己基）酯（DEHP），邻苯二甲酸二正戊酯（DAP）、邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二正丙酯（DPP）、邻苯二甲酸丁基苄酯（BBP）、邻苯二甲酸二正丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二环己酯（DCHP）、邻苯二甲酸二正己酯（DHP）、邻苯二甲酸戊基异戊酯（DnIPP）（上述标准品来源于Dr.Ehrenstorfer GmbH）。
有关物质对照品：盐酸奥洛他定杂质E（批号101099-200901，来源：中国食品药品检定研究院）；盐酸奥洛他定杂质C（批号:R065M0，来源:USP，含量99.0%）；盐酸奥洛他定杂质B（批号:R077Q0，
来源:USP，含量：100.0%）；盐酸奥洛他定杂质甲醛衍生物（批号:1-VHP-134-4，来源:Toronto Research Chemicals，含量97.0%）。盐酸奥洛他定对照品（批号：R058Q0，来源：USP，含量:99.9%）。
1.3十品盐酸奥洛他定滴眼液（国产某厂家，规格5mL：5mg，批号170558、170733、170459、170460、170674、170622、170689、1701015、1701071）。原研制剂（诺华制药生产，规格5mL：5mg，批号17G06AA, 17H02AG）。
2方法与结果
2.1.法定检验首先依照法定标准检验，国产盐酸奥洛他定滴眼液一批次不合格，不合格项为装量。从“检测结果”角度衡量，国产制剂质量良好。研究中发现国产滴眼剂质量标准有关物质控制不严，如标准中未对特定杂质进行控制。
2.2探索性研究探索性研究首先针对法定检验中发现的问题。其次，也关注药品整个生命周期高风险因素，兼顾我国监管方向，开展针对性研究。研究内容包括原料药及制剂的有关物质研究、制剂抑菌剂及抑菌效力的研究、包材的研究、毒性元素的研究，对于建立的方法均进行了方法学考察。
2.3有■•关物质的对比研究本研究建立了新的有关物质检查法，对原料和制剂检测分析，该法专属、灵敏。
谱条件为辛基硅烷键合硅胶为填充剂（In- tertsil C8,5pm,4.6mmX250mm）；以0.5%十二烷基硫酸钠的磷酸盐溶液和乙腈的混合溶液［称取十二烷基硫酸钠5.0g，用0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用10%磷酸溶液调节pH至
3.5）-乙月青（55：45）的混合溶液溶解并稀释至1000mL］为流动相，检测波长为299nm，柱温40，进样量50pL o方法学验证表明，本法专属、灵敏⑷。
2.4抑菌剂研究抑菌剂对本品安全、有效性均有较大影响，也是近年来监管的主要关注点。探索性研究中开展了与原研制剂抑菌剂的种类、含量的对比研究，抑菌效力研究。
2.4.1谱条件谱柱：CN柱，SHISEIDO5pm 4.6mmX250mm，流动相：乙青-0.1mol/L醋酸铵缓冲溶液（pH5.0）（65：35）。检测波长260nm，流速
1.0mL/min，进样体积：20pL。
2.4.2溶液的制备对照品溶液的制备C12苯扎氯铵对照品49.90mg、"苯扎氯铵对照品49.99mg，置同一50mL棕量瓶中，加乙青溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取1mL，置10 mL量瓶中，加乙青稀释至刻度，摇匀，作为含量测定对照品溶液。供试品溶液的制备：直接取滴眼剂作为供试品溶液。
2.4.3方法学考察
2.4.
3.1标准曲线与线性范围精密量取对照品储备液3mL、5mL、8mL、10mL，分别置100mL量瓶中，加乙青稀释至刻度，摇匀，作为标准系列溶液③、④、⑤、⑥。精密量取标准系列溶液⑥1.0mL，置10 mL量瓶中，加乙青稀释至刻度，摇匀，作为标准系列溶液②。精密量取标准系列溶液④1.0mL，置10mL 量瓶中，加乙青稀释至刻度，摇匀，作为标准系列溶液①。
照“2.4.1”项下的谱条件，进样分析:C「2苯扎氯铵在4.880-146.41pg/mL范围内线性关系良好，Y=978x+836（r=0.9999）；C14苯扎氯铵在5.218156.53pg/mL范围内线性关系良好，Y=930x+111（r=0.9997）。
2.4.
3.2回收率精密称取对照品适量，制成回收率测试对照品溶液。取空白辅料溶液，向其中加入低中高三个浓度水平的对照品溶液，制成低中高三个浓度水平的回收率测试溶液，依法测定，结果如表1中所示，表明该法平均回收率为99.7%，表明本法
准确度良好。
表1回收率试验结果
名称
加入量
(Mg)测得量
(Mg)
回收率
(%)
平均回收率(％)
Cn苯扎氯铵117.1116.899.7
117.1115.999.0
117.1118100.8
97.997.099.1
97.997.499.599.6
97.997.299.3
49.148.999.6
49.149.099.8
49.148.899.4
C14苯扎氯铵120.4120.199.8
120.4121.1100.6
120.4120.299.8
98.197.699.5
98.197.399.299.6
98.197.999.8
49.549.199.2
49.549.299.4
49.549.299.4
2.4.
3.3系统精密度试验精密量取同一批号(批号170558)供试品溶液，重复进样6次，各峰面积的RSD小于0.8%，表明本法精密度良好。
2.434定量限与检测限精密量取对照品溶液逐级稀释，进样分析，使得峰高约为信噪比的10倍，测得Cn,C14苯扎氯铵定量限浓度依次为0.7808Mg/ mL,0.8213Mg/mL；同法逐级稀释，使得峰高约为信噪比的3倍，测得C12,C14苯扎氯铵检测限浓度为0.2342Mg/mL,0.2867Mg/mL。
2.435专属性分别量取2.4项下的流动相、样品稀释剂、苯扎氯铵对照品溶液、供试品溶液，依2.3
图1苯扎氯铵谱图
表2抑菌剂含量测定结果(Mg/mL)
批号厂家Cu苯扎氯铵C14苯扎氯铵
17G06AA原研69.534.0
17H02AG原研68.134.2
161001国产制剂101.1-
170602国产制剂103.0-
180308国产制剂102.9-
171203国产制剂103.4-
171001国产制剂102.9-
171201国产制剂101.4-
2.5抑菌效-力研究
2.5.1菌液制备取大肠埃希菌，金黄葡萄球菌，铜绿假单抱菌，白念珠菌的新鲜琼脂培养物，加入适量0.9%无菌氯化钠溶液将菌苔洗下，将菌悬液移至无菌试管中，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成约108cfu/mL的菌悬液。取黑曲霉的新鲜培养物加入5mL含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗下，即为108cfu/mL的菌悬液。2.5.2测定方法取样品5支(5mL/支)，将内盖拔出，分别加入上述制备的5种菌悬液各50m L，盖上内盖和外盖，充分混匀，置24X培养箱中避光贮存28d。分别于6h、24h、7d、14d、28d取溶液1 mL，稀释成10-1,10-2,10-3,10-4,10-55个稀释浓度，分别1mL/皿加入平皿中,2皿/稀释级，金黄葡萄球菌，大肠埃希菌，铜绿假单抱菌分别加入胰酪大豆胨琼脂培养基,34X培养48h，白念珠菌和黑曲霉加入沙氏葡萄糖琼脂培养基,24X培养72h，计数，结果见表3。
2.6包材的研究近年来,EMA和FDA相继发布指导原则，将包材作为眼用制剂的高风险因素。盐酸奥洛他定滴眼液包材为低密度聚乙烯(LDPE)，可能存在迁移出塑化剂的风险。本研究开展了包材中可能存在的十种塑化剂的风险监测及密闭性研究。
2.6.1塑化剂研究气相谱柱：甲基(5%苯基)聚硅氧烷为固定相SH-RXI-5sil(30m,250m^x 0.25Mm)；程序升温，初始温度为150X，保持5 min，再以40X/min升至220X，保持15min。进样口280X，流速1.0mL/min，电离方式EI，溶剂延迟5min，分流进样，进样量1m L。
质谱条件：电子轰击离子源，电离能力70eV，离子源温度：250X，四级杆温度150X。取十种塑化剂对照品溶液，逐级稀释，以信噪比的3倍作为检出限浓度，各化合物定性离子见表4
。
表311批次样品抑菌效力测定结果
减少的lg值
菌种(category)检测时间--------------------------------------------------
17G06AA17H02AG17055817073317045917046017067417062217068917010151701071大肠埃希菌6h 6.5 6.4 6.5 6.5 6.4 6.4 6.4 6.0 6.0 6.0 6.0 (Escherichia coli)24h 6.5 6.4 6.5 6.5 6.4 6.4 6.4 6.0 6.0 6.0 6.0 7d 6.5 6.4 6.5 6.5 6.4 6.4 6.4 6.0 6.0 6.0 6.0
14d 6.5 6.4 6.5 6.5 6.4 6.4 6.4 6.0 6.0 6.0 6.0
28d 6.5 6.4 6.5 6.5 6.4 6.4 6.4 6.0 6.0 6.0 6.0金黄葡萄球菌6h 6.1 6.5 6.1 6.1 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 (Staphylococcus aureus)24h 6.1 6.5 6.1 6.1 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 7d 6.1 6.5 6.1 6.1 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5
14d 6.1 6.5 6.1 6.1 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5
28d 6.1 6.5 6.1 6.1 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5铜绿假单抱菌6h 6.6 6.5 6.6 6.6 6.5 6.5 6.5 6.3 6.3 6.3 6.3 (Pseudomonas aeruginosa)24h 6.6 6.5 6.6 6.6 6.5 6.5 6.5 6.3 6.3 6.3 6.3 7d 6.6 6.5 6.6 6.6 6.5 6.5 6.5 6.3 6.3 6.3 6.3
14d 6.6 6.5 6.6 6.6 6.5 6.5 6.5 6.3 6.3 6.3 6.3
28d 6.6 6.5 6.6 6.6 6.5 6.5 6.5 6.3 6.3 6.3 6.3白念珠菌6h 6.7 6.80.9 1.0 1.5 2.8 1.60.50.50.50.4 (Candida albicans)24h 6.7 6.8 5.7 6.7 6.8 6.8 6.8 6.4 6.4 6.4 6.4 7d 6.7 6.8 6.7 6.7 6.8 6.8 6.8 6.4 6.4 6.4 6.4
14d 6.7 6.8 6.7 6.7 6.8 6.8 6.8 6.4 6.4 6.4 6.4
28d 6.7 6.8 6.7 6.7 6.8 6.8 6.8 6.4 6.4 6.4 6.4黑曲霉6h 6.3 6.3 4.9 4.2 4.4 4.2 4.6 4.1 4.2 4.8 4.8 (Aspergillus niger)24h 6.3 6.3 6.3 6.3 6.3 6.3 6.3 6.4 6.4 6.4 6.4 7d 6.3 6.3 6.3 6.3 6.3 6.3 6.3 6.4 6.4 6.4 6.4
14d 6.3 6.3 6.3 6.3 6.3 6.3 6.3 6.4 6.4 6.4 6.4
28d 6.3 6.3 6.3 6.3 6.3 6.3 6.3 6.4 6.4 6.4 6.4
表4典型定性离子
化合物时间(min)定性离子(m/z)检出限浓度(ng/mL) DMP 5.171638.19
DEHP13.181498.92
DAP9.541499.68
DPP7.501499.46
DBP8.511499.91
DCHP13.091498.74
DEP 6.601498.92
BBP15.111498.62
DHP10.951498.74
DnIPP9.068,9.288,9.5271498.01
2.6.2密闭性研究基于装量不合格项针对性开展。测定法：取本品7支，将其置于用1%亚甲蓝水溶液的容器内，加挡板，使滴眼剂瓶完全浸没，每天观察。
2.7毒性元素研究元素研究是滴眼剂中的高风险因素。ICH及各国药政部门越来越重视该项研究。本文建立了ICP-MS法测定了四种毒性元素，并进行了国产制剂与原研制剂的对比研究。
2.7.1溶液的制备标准溶液的制备：精密量取各单元素溶液适量，加0.5mol/L硝酸逐步稀释，制成含Pb.As.Cd质量浓度分别为0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0pg/L标准系列工作溶液。同法制备浓度分别为0.1、0.5、1.0、5.0、8.0、10.0pg/L Hg 标准系列工作溶液(本溶液临用新制)。
内标溶液的制备：精密量取铢(Re)、铑(Rh)元素溶液适量，加0.5mol/L硝酸逐级稀释制成含Re、Rh20pg/L的溶液。以Re为内标测定Hg、Pb元素，以Rh为内标测定As、Cd元素。
供试品溶液的制备：取本品5支混匀。精密量取2mL置10mL量瓶中，加0.5mol/L硝酸稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
空白溶液的制备：直接取0.5mol/L硝酸溶液作为空白溶液。
2.7.2ICP-MS测定条件功率1500W，冷却气体流量14L/min；雾化体积流量1.0mL/min，采样深度5mm，扫描次数20；重复次数3；采用碰撞反应池
模式；蠕动泵转速40r/min。坐标，各元素与响应内标计数值的比值为纵坐标，绘2.7.3方法学考察制标准曲线，得各元素的回归方程，相关系数和线性2.7.3.1线性关系考察照“2.7.2”项下的测定条范围。结果
见表5。
件，依次测定标准系列溶液，以对照品质量浓度为横
表5各元素的线性关系、检测限及精密度
元素线性方程r线性范围/(Mg/L)检测限/(Mg/L)精密度RSD/(%) 75As Y=1.780x103X+2.236x1020.99990.5〜1000.020.7
111Cd Y=3.359x103X+85.170.99990.5〜1000.02 1.1
208Pb Y=1.379x106X+1.686x1030.99990.5〜1000.60.9
202「Hg Y=1.605x104X+5.187x1030.99450.1〜100.02 2.6
2.732精密度试验取混合标准溶液、Hg单元素
标准溶液，连续进样六次，测定各元素的量,RSD值
在0.7%〜2.6%之间，结果见表5表明仪器的精密度
良好。
2.733检测限连续测定样品的空白溶液10次,
测定元素的信号响应值，以各元素与响应内标计数
值的比值的标准偏差(6)的3倍所对应的质量浓度
为检出限，结果见表5。结果显示，各元素的检出限
均能满足分析要求。
2.734稳定性试验精密量取本品，照”2.7.1”项
下的方法制备供试品溶液，分别于制样后的0、4、6、
8、16、24h进样分析，测定个元素的量，各元素的
RSD在4.1%〜4.9%，结果见表6，表明样品在制备
后24h内稳定。
2.735加样回收率试验取空白辅料溶液，分别
精密加入各元素标准溶液，依法测定，计算平均回收
率在95.2%~101.2%之间,RSD均小于5.0%(n=
6)，结果见表6。
表6稳定性及回收率试验结果(n=6)
元素稳定性(％)回收率(%) RSD平均值RSD
75As 4.197.6 4.0
111Cd 4.995.2 4.6
208Pb 4.4101.2 4.0
202Hg 4.997.6 4.7
2.736样品测定取本品样品，依各项下方法制备供试品溶液。结果见表7。综上，结果说明：(1)国产制剂毒性元素的量略低于原研制剂一致。(2)国产制剂抑菌剂总浓度与原研制剂一致，但是同系物组成不同。进一步抑菌效力研究结果表明，抑菌效力基本一致，结果见表5。(3)塑化剂均未检出。
表7各项检测结果
批号
毒性元素/(Mg/L)
厂家75As111Cd208Pb202Hg 17G06AA原研 2.4228--0.0826 17H02AG原研 2.5763--0.0534 161001国产制剂 1.9228--0.0255 170602国产制剂 1.6990--0.0211 180308国产制剂 1.6550--0.0265 171203国产制剂 1.5130--0.0210 171001国产制剂 1.8650--0.0240 171201国产制剂 1.7121--0.0274
3讨论
3.1法定检验国产制剂质量标准总体可行，但建议提升和改进有关物质检查法，对四种降解产物按加校正因子的主成分自身对照品进行控制。其次，应规定渗透压摩尔浓度范围。
3.2探索性研究课题组结合多年研究实践，参考ICH指导原则，提出基于风险控制理念的探索性研究思路。本研究的亮点在于研究理念，即不走推倒重来的激进之路，也避免走研究不充分的老路。应发挥监管平台优势，关注我国国情下的高风险因素，并将之贯穿于药品整个生命周期，重点关注对安全性、有效性、质量可控性有重大影响的高风险因素。表8归纳了这些高风险因素，并采取的技术手段及实验结果。除技术手段外，我们也对国产企业了实地调研，未发现问题。本研究全面评估国产制剂的质量，并
对现行质量标准进行提升。
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